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00007血液中乙醇的测定
00008顶空气相色谱法
000081　范围
本技术规范规定了血液中乙醇的顶空气相色谱测定方法。
本技术规范适用于血液中乙醇的定性及定量分析。
本技术规范的方法检出限为0.01mg/ml；定量下限为0.05mg/ml。
000082　规范性引用文件
下列文件对于本技术规范的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本技术规范。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本技术规范。
gb/t 6682  分析实验室用水规格和试验方法（gb/t 6682-2008，iso 3696：1987，mod）
ga/t 122  毒物分析名词术语
000083　原理
本法利用乙醇的易挥发性，以叔丁醇为内标，用顶空气相色谱火焰离子化检测器进行检测，经与平行操作的乙醇对照品比较，以保留时间进行定性分析；以峰面积为依据，用内标法定量。
000084　试剂和材料
除另有说明外，水为gb/t 6682规定的二级水。
000084.1　乙醇
色谱纯。
000084.2　乙醇标准溶液
精密称取适量乙醇，用水配成10.0mg/ml乙醇标准储备溶液。储备液在冰箱中冷藏密闭保存，有效期为6个月。试验中所用其它浓度的标准溶液均从上述储备液稀释而得，在冰箱中冷藏密闭保存，有效期为3个月。
000084.3　叔丁醇
色谱纯。
000084.4　叔丁醇溶液
精密称取适量叔丁醇，用水配成5.0mg/ml叔丁醇储备液。储备液在冰箱中冷藏密闭保存，有效期为12个月。将储备液用水稀释，得40.0μg/ml叔丁醇内标工作液，在冰箱中冷藏密闭保存，有效期为6个月。
000085　仪器 
000085.1　
配火焰离子化检测器（fid）。
000085.2　顶空进样器
配1ml定量进样环。
000085.3　样品瓶
10ml，顶空自动进样器用。
000085.4　硅橡胶垫
000085.5　铝帽
000085.6　密封钳
000085.7　精密移液器
000085.8　自动稀释仪
000086　测定步骤
000086.1　样品处理
用精密移液器或自动稀释仪取待测血液0.10 ml及0.50 ml 40.0μg/ml 叔丁醇内标工作液，加入样品瓶内，盖上硅橡胶垫，用密封钳加封铝帽，混匀。
000086.2　测定
000086.2.1　顶空气相色谱测定参考条件
a） 色谱柱（1）：db-alc1（30m´0.32mm´1.8mm）石英毛细管柱或相当者；
柱温：恒温40°c；
色谱柱（2）：db-alc2（30m´0.32mm´1.2mm）石英毛细管柱或相当者；
柱温：恒温40°c；
b） 载气：氮气，纯度≥99.999%，流速8ml/min；
c） 进样口温度：150°c；
d） 检测器温度：250°c；
e） 加热箱温度：65°c；
f） 定量环温度：105°c；
g） 传输线温度：110°c；
h） 气相循环时间：3.5min；
i） 样品瓶加热平衡时间：10.0min；
j） 样品瓶加压时间：0.10min；
k） 定量环充满时间：0.10min；
l） 定量环平衡时间：0.05min；
m） 进样时间：1.00min。
000086.2.2　定性测定
样品溶液按照顶空气相色谱测定条件测定，以叔丁醇为内标，记录色谱峰的保留时间。将待测样品色谱峰的保留时间与乙醇标准对照品的保留时间比较，相对误差在±2%内，空白对照样品内标物色谱峰正常而无乙醇的色谱峰，一般可以认为待测样品中含有乙醇；必要时，选择不同的色谱条件或用气相色谱-质谱法确证。如果内标物色谱峰正常，而无乙醇的色谱峰时，可认为检验结果为阴性。乙醇对照品和内标气相色谱图，参见附录a。
000086.2.3　定量测定
本方法采用内标法－校准曲线法或内标法－单点校正法定量测定。
6.2.3.1  内标法－校准曲线法
采用内标-校准曲线法测定（见附录b）。将乙醇对照品溶液进样，以乙醇和内标峰面积比为纵坐标，乙醇对照品工作溶液浓度为横坐标绘制标准曲线，用标准曲线对待测样品进行定量，所测样品中乙醇的浓度值应在线性范围内。
6.2.3.2  内标法－单点校正法
待测血液样品乙醇浓度在标准溶液浓度的±30%内可用单点法定量。
000086.3　平行试验
按以上步骤对同一待测样品进行平行试验。
单柱单检测器两份样品测定结果按两份样品的平均值计算，双样相对相差不得超过10％（有凝血块的血样不超过15％）。双样相对相差按式（1）计算：
                                    | c₁ - c₂|
双样相对相差（%） = ¾¾¾¾¾ ´ 100     ………………………………（1）
                                      `c
 
式中：
c<sub>1</sub>、c<sub>2</sub>¾¾两份样品平行定量测定的结果；
`c ¾¾两份样品平行定量测定结果的平均值(c₁ c₂)/2。
双柱双检测器两份样品测定结果的相对标准偏差rsd（%）若不超过5％时（有凝血块的血样不超过10%），结果按两份样品结果的平均值计算。
000087　结果计算
血液中乙醇浓度测定采用内标法－校准曲线法定量或按式(2)计算：
                                 a´ a_i′´c          
                   c = ¾¾¾¾¾¾         …………………………………（2）
                                  a′´a_i             
 
式中：
c¾¾血液样品中乙醇浓度，单位为毫克每毫升(mg/ml)；
a¾¾血液样品中乙醇的峰面积；
a′¾¾标准溶液中乙醇的峰面积；
a_i′¾¾标准溶液中内标物的峰面积；
a_i¾¾血液样品中内标物的峰面积；
c¾¾标准溶液中乙醇浓度，单位为毫克每毫升(mg/ml)。
 
 
 
附　录　a
（资料性附录）
乙醇对照品和内标气相色谱图
a.1 按色谱柱（1）条件得乙醇对照品和内标气相色谱图，见图a.1。

图a.1 按色谱柱（1）条件得的乙醇对照品和内标气相色谱图
 
a.2 按色谱柱（2）条件得乙醇对照品和内标气相色谱图，见图a.2。
 
图a.2 按色谱柱（2）条件得的乙醇对照品和内标气相色谱图
 
 
 
 
 
附　录　b

（资料性附录）
校准曲线
配制乙醇浓度为0.10、0.20、0.50、0.80、1.00、2.00、3.00mg/ml的水溶液，按6.1和6.2项下分析，每一浓度点取2份，以乙醇与内标叔丁醇的峰面积比对乙醇浓度做标准曲线。